题记:免疫学是一门经验性学科,很多时候,理论知识经不起实验的检验。
相关背景
我们都知道,测抗体的方法有多种多样,比如:双抗原夹心法、间接法、中和试剂竞争法、阻断法等,但是普遍认为,最常用以及最靠谱的是双抗原夹心法。这里简单介绍下双抗原夹心法,其他测抗体方法自己百度一下。双抗原夹心法是指板上包被抗原,酶为标记抗原,两个抗原中间夹着抗体,形成夹心。这种夹心形式类似于双抗体夹心,但是结构不同,同样的,双抗原夹心也需要用到抗原配对。到这里,大家应该基本知道了原理。那进入我们本次的实验,本次实验目的在于开发一个乙肝表面抗体(HBsAb)试剂盒。
相关材料准备
包被抗原:板1;板2
标记抗原:酶1;酶2;酶3
实验过程
首先我要测一下,这6组配对,测人血清的结果,看看准确度怎么样,参加本次实验的,还有某上市试剂盒,结果如下图:
看上去,我们的6组配对,值都偏低,阴阳性不容易判断出来,于是乎,我们调整包被浓度与酶浓度,以最简单的测试方法,挑选1例阳性血清,进行稀释拉梯度,并于上市试剂盒进行对比,结果如下图:
效果很明显,配对板1酶3、板2酶3与上市试剂盒测得值非常接近,于是我们选取了这两组配对进行后续实验,以调整后的板浓度、酶浓度,再次测一批人血清,并于上市试剂盒进行对比,结果又来了,如下图:
一眼望去,阴阳性符合率,甚至是OD值都基本相近,于是我们以OD值进行相关性分析。
板1酶3与上市试剂盒相关性如下图:
板2酶3与上市试剂盒相关性如下图:
两组阴阳性符合率相关性都达到0.95以上了,已经是很完美的了。
然后我们认为找到了一组非常好的配对,高兴的不得了。
正准备进行性能评估,实验室进行了一轮全部项目同源性测试,我突发奇想,双抗原夹心也可以参与同源性测试,这一测,不得了,我对于双抗原夹心没有好感了!哈哈。开个玩笑,我们直接上数据,如下图:
从数据可以看出,人血清和兔血清,我们的配对都能应付,羊血清勉强应付,但是这个鸡血清,谁来给解释一下,这是怎么回事?我们的配对为什么会跟鸡血清交叉这么严重?
至此,这个项目又卡住了,那么好,我们在回头研究下之前的数据,有一个细节,或许大家和我一样,忽略了,就是我们有6组配对,在经过板浓度与酶浓度调整之后,砍掉了四对,保留了2对,我们再回顾下刚才砍掉的数据:
有没有发现什么问题?另外四组配对很相似,而且如果把板1酶3或板2酶3第一个点加到这四组前面,是不是这四组梯度和这两组一样,也就是说,这四组配对很可能只是线性范围比这两组宽,测血清的准确度,有没可能更好?终于又有了新的希望,这四组配对能否解决这个鸡血清的问题,还有待进一步实验,至此,实验结束。
讨论
我们常常鼓励实验技术人员要反复看自己做过的实验,做过的数据,只有反反复复的看,才会发现新的问题,说不定还会有新的思路。双抗夹心法,值得深入研究,因为涉及的问题太多了,我们还只是测了兔子、羊、鸡这些动物血清,还有很多其他动物,所以试剂盒开发没有那么简单,要反复论证,反复实验,里面的门道真的很多,免疫学是一门经验性学科,很多时候,理论知识经不起实验的检验。
如果大家有什么新的思路,可以留言哦,我们有条件的,都会第一时间安排上实验,并第一时间分享出来,大家一起学习讨论,助力我们国家的免疫学科研。
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