本发明属于食品保鲜技术领域，具体涉及一种果蔬类复合生物保鲜剂及其制备方法。
背景技术：
果蔬因其味美爽口，开胃助食，且能够提供人体易缺乏的维生素、矿物质和有机酸，保障人们的身体健康，而成为人们所喜爱的重要的营养食品。但果蔬生产季节性和地域性很强，含水量高，易失水萎蔫、腐烂变质，在贮运、销售过程中损失很大。目前，我国果蔬产品产量在世界上拥有绝对的优势，然而与果蔬生产发展速度形成鲜明对比的是：缺乏完善的果蔬采摘后防烂果处理与保鲜流通体系。据统计，现阶段新鲜果蔬的腐烂、变质损耗率较高，达到40％～50％，给果农和果蔬市场带来了巨大的经济损失，也威胁着消费者的健康。因此，做好果蔬的贮藏保鲜工作，保证旺季不烂，淡季不断，使市场可以做到周年均衡供应，从而提高经济和社会效益，对増加果蔬生产经营者的收入，提高人们的生活质量具有非常重耍的意义。
果蔬的保鲜防腐是保证其品质的重要环节，如何能延长果蔬的保藏时间，是果蔬贮藏中需要解决的一个重大问题。目前，我国采取的主要贮藏方法为化学药剂保鲜法、低温贮藏法、气调保鲜法等，其中化学药剂保鲜法比较常用，但其存在严重的食品安全隐患，所以发展无公害型的果蔬保鲜剂来控制果蔬采后的腐败劣变等病害问题成为一种新趋势。
在果蔬贮藏中，采后病害包括软腐病、灰霉病、褐腐病、青霉病、梨灰霉病、青霉病和蒂腐病等，所以对植物病原菌有拮抗作用的有益微生物开始被应用到果蔬采摘后的病害防治中。此类有益微生物具有高效安全性，既能抑制病原菌生长，防止果蔬的腐败劣变，又不会对果蔬造成“二次污染”损害人体健康。目前较为常用的抑制有害微生物从而有利于果蔬防腐保鲜的有益微生物包括酵母菌、细菌和小型丝状真菌等，它们可以在果蔬表皮成功繁殖，与病原菌形成竞争性抑制，并通过分泌抗菌物质杀灭病原菌和/或抑制其生长。同时，还能够诱导果蔬释放自身的抗菌物质，抵御病原菌入侵，从而达到延长果蔬贮藏时间的目的。
在微生物保鲜剂成为果蔬贮藏研究热点的同时，植物源保鲜剂凭借其高效、天然、无毒、安全及性能稳定等优势，亦已成为国内果蔬保鲜贮藏的另外一个应用热点。我国拥有品种繁多的植物资源，目前已经有很多种类被证实其含有抗菌保鲜作用的功效成分(包含一些香辛料和中草药)，可有效抑制果蔬的腐败劣变，增加果蔬的保藏时间。其大致的作用机理为：植物有效成分可以抑制附着在果蔬表面微生物的活动，使其生理活动维持较低水平，降低了微生物对果蔬的侵染；同时，有效成分在果蔬表面会形成一层膜，这层膜可以降低果蔬内部水分的散失，削弱果蔬的呼吸强度，从而延长果蔬贮藏时间，同时可有效阻止外来病害微生物对果蔬新的侵害。文献表明，将微生物源保鲜剂与植物源保鲜剂两种生物源的果蔬保鲜成分共同使用，在排除了物理和化学保鲜剂各种缺陷的前提下，能够有效抵御微生物病害、同时诱导果蔬自身防御系统抵御病原菌入侵、且降低果蔬的水分散、削弱果蔬呼吸强度等，据此更加有效地延长果蔬贮藏时间、发挥对果蔬的保鲜作用的复合生物保鲜剂，目前报道极少。
技术实现要素：
本发明要解决的技术问题在于提供一种降低病原菌所致的果蔬病害以及内部水分散失、延长贮藏时间、且无毒无害的果蔬类复合生物保鲜剂及其制备方法。
为解决上述问题，本案发明人经过长期研究和大量实践，得以提供本发明技术方案，具体实施过程如下：
1.一种果蔬类复合生物保鲜剂，按体积份计，包括以下成分：微生物发酵液30～60份、柑橘皮提取液1～20份、冬凌草提取液1～10份、壳聚糖溶液1～10份、蜂胶提取液1～10份、纳他霉素0.01～0.05份和水30～50份；所述微生物发酵液为酵母菌发酵液。
优选的，按体积份计，包括以下成分：微生物发酵液50份、柑橘皮提取液10份、冬凌草提取液5份、壳聚糖溶液5份、蜂胶提取液5份、纳他霉素0.02份和水30份。
优选的，所述酵母菌发酵液的培养方法为：
a、活化：将酵母菌接种于nyda平板培养基中，30℃培养16-20小时，重复传代2次；
b、培养：nydb液体培养基中接种活化好的酵母菌，150r/min，30℃培养22小时；
c、离心分离：酵母菌培养液7000r/min离心10min，弃去上清液，无菌水冲洗3次，血球计数板调节浓度为1×106-1×109个/ml的菌悬液，即可。
优选的，所述酵母菌为以质量比为1:1混合的间型假丝酵母菌和和罗伦隐球酵母菌。
优选的，所述柑橘皮提取液的提取方法为：将柑橘皮粉碎，放入乙醇溶液中浸泡，然后采用微波浸提，再加入活性炭进行脱色，过滤，即得柑橘皮提取液。
优选的，所述柑橘皮提取液的提取方法中，乙醇溶液的浓度为75％，柑橘皮与乙醇溶液按g:ml计为1:30。
优选的，所述柑橘皮提取液的提取方法中，微波浸提的功率为600～800w，温度为80～90℃。
优选的，所述柑橘皮提取液的提取方法中，活性炭加入的质量为柑橘皮提取液体积的10％。
优选的，所述冬凌草提取液的提取方法为：将冬凌草用中药粉碎机粉碎，放入乙醇溶液中浸泡，采用微波处理，然后转入回流装置进行回流反应，再加入活性炭脱色，过滤，即得冬凌草提取液。
优选的，所述冬凌草提取液的提取方法中，乙醇溶液的浓度为85％，冬凌草与乙醇溶液按g:ml计为1:25。
优选的，所述冬凌草提取液的提取方法中，微波处理的功率为100～120w，温度为40～50℃。
优选的，所述冬凌草提取液的提取方法中，活性炭加入的质量为冬凌草提取液体积的10％。
优选的，所述蜂胶提取液的提取方法为：将蜂胶置于0℃下冷冻，粉碎，然后加入乙醇溶液，浸泡24小时以上，摇荡过滤，即得蜂胶提取液。
优选的，所述蜂胶提取液的提取方法中，乙醇溶液的浓度为95％，蜂胶与乙醇溶液按g:ml计为1:40。
2.一种果蔬类复合生物保鲜剂的制备方法，包括以下步骤：将壳聚糖加入到柠檬酸中进行加热充分溶解，即得微酸、溶解状态的壳聚糖溶液；然后加入微生物发酵液、柑橘皮提取液，冬凌草提取液和蜂胶提取液，搅拌混匀；最后加入纳他霉素和水，混匀，即可。
优选的，所述柠檬酸溶液中柠檬酸的质量浓度为0.8～1.2％，壳聚糖与柠檬酸溶液按g:ml计为1:100。
其中，酵母菌中的间型假丝酵母和罗伦隐球酵母均是具有广谱抑菌效果的酵母菌，常用于水果蔬菜的采后病害防治，国内外多有报道，二者均可从市场购得，其规格符合国家行业标准。
柑橘皮提取物对霉菌有较强的抑菌作用；冬凌草同时兼有抗菌、抗氧化的作用；蜂胶含有多种成分，芦丁、槲皮素、高良姜素、咖啡酸、a-儿茶素等黄酮类化合物具有很强的抗氧化作用，特别是蜂胶里的黄酮类具有抗菌、抗氧化等作用。
壳聚糖是《食品添加剂使用卫生标准》(gb2760-)批准使用的被膜剂，壳聚糖是一类广泛存在于甲壳动物和节肢动物以及细菌细胞壁中的多糖类化合物，本身无味、无毒无害，对腐败菌、致病菌，包括大肠杆菌、枯草杆菌、葡萄球菌、黑曲霉、假丝酵母都有抑制作用，并且具有良好的成膜性，可将食品营养物质与空气或微生物隔离，延缓氧化和感染，在微酸和溶解状态条件下，壳聚糖亦能很好地深入果蔬皮肉中，由于壳聚糖分子的正电荷和细菌细胞膜上负电荷的相互作用，使细胞内的蛋白酶和其他成分泄漏，从而达到抗菌、杀菌作用。
纳他霉素(natamycin)是一种由链霉菌发酵产生的天然抗真菌化合物，属于多烯大环内酯类，既可以广泛有效的抑制各种霉菌、酵母菌的生长，又能抑制真菌毒素的产生，已被广泛用于食品防腐保鲜以及抗真菌治疗。
本发明的果蔬类复合生物保鲜剂的应用方法为：待果蔬采摘后，直接将混合溶液喷施在果蔬表面即可。
本发明的有益效果在于：
本发明的果蔬类复合生物保鲜剂中的，微生物发酵液、壳聚糖溶液、蜂胶提取液、柑橘皮提取液和冬凌草提取液的混合物在果蔬表面形成一层保护膜，抑制果蔬的呼吸强度，减少果蔬内部的水分蒸发，保持果蔬的硬度，且在一定程度上可以避免果蔬在机械损伤过程中受到有害微生物的侵染，同时，纳他霉素能有效地抑制各种霉菌、酵母菌的生长，又能抑制真菌毒素的产生，二者共同作用，抑制了果蔬水分的蒸发、减少了有害物质的侵害，抑制了有害微生物的生长繁殖，达到了对果蔬的保鲜、防腐、抗氧化功能，且安全、高效、操作简单、成本低廉，显著降低了果蔬贮藏的腐烂、失水，增加了货架期，延长了果蔬的寿命。
附图说明
下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步的详细说明，其中：
图1本发明的果蔬类复合生物保鲜剂的果蔬保鲜制作工艺流程图。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好的理解本发明并能予以实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。
实施例1
本实施例中的果蔬类复合生物保鲜剂的制备方法，包括以下步骤：
s1、微生物发酵液的培养：a、活化：将质量比为1:1混合的间型假丝酵母菌和和罗伦隐球酵母菌接种于nyda平板培养基中，30℃培养16-20小时，重复传代2次；b、培养：nydb液体培养基中接种活化好的酵母菌，150r/min，30℃培养22小时；c、离心分离：酵母菌培养液7000r/min离心10min，弃去上清液，无菌水冲洗3次，血球计数板进行活菌计数，调节浓度为1×106-1×109个/ml的菌悬液，即得；
s2、将10g柑橘皮粉碎，放入浓度为75％的300ml乙醇溶液中浸泡，然后在功率为700w，温度为80℃条件下，微波浸提0.5h，再加入10％的活性炭进行脱色，过滤，即得柑橘皮提取液；
s3、将10g冬凌草干饮片用中药粉碎机粉碎，放入浓度为85％的250ml乙醇溶液中浸泡，在温度为45℃，功率为100w条件下，进行微波处理10min，然后转入回流装置进行回流反应1h，再加入10％的活性炭进行脱色，过滤，即得冬凌草提取液；
s4、将10g蜂胶置于0℃下冷冻后，胶体磨低温粉碎，然后加入浓度为95％的400ml乙醇溶液，浸泡24小时以上，摇荡过滤，即得蜂胶提取液；
s5、将1g壳聚糖加入到100ml柠檬酸中进行加热充分溶解，即得微酸、溶解状态的壳聚糖溶液；
s6、取微生物发酵液50ml、柑橘皮提取液10ml、冬凌草提取液5ml、蜂胶提取液5ml、纳他霉素0.02ml和无菌水30ml，搅拌混匀，即得果蔬类复合生物保鲜剂。
效果验证：
果蔬保鲜制作工艺流程图，如图1所示，以新鲜小白菜为例，将喷施本实施例1中的果蔬类复合生物保鲜剂的小白菜与为添加任何保鲜剂的新鲜小白菜，同时放置于4℃下保存。根据国标规定的微生物-卫生学检验标准，在将小白菜分别存放1天、6天和10天后对添加果蔬类复合生物保鲜剂的小白菜和未添加任何保鲜剂的小白菜中的菌落总数和大肠菌群进行检测分析，结果如表1所示，其中，致病菌包括沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和志贺氏菌。
表1新鲜小白菜存放过程中微生物生长对比表
从表1中分析可知，未添加任何保鲜剂的小白菜的保质期小于3天，且在第三天已经检测出了致病菌，而添加本发明实施例1果蔬类复合生物保鲜剂的小白菜的保质期可达10天以上，充分证明了本发明的果蔬类复合生物保鲜剂具有良好的抗菌、抑菌效果，在果蔬类保鲜过程中具有广泛的实用价值。
以上所述实施例仅为充分说明本发明而所举的较佳的实施例，本发明的保护范围不限于此。本技术领域的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换，均在本发明的保护范围之内。本发明的保护范围以权利要求书为准。
技术特征：
1.一种果蔬类复合生物保鲜剂，其特征在于，按体积份计，包括以下成分：微生物发酵液30～60份、柑橘皮提取液1～20份、冬凌草提取液1～10份、壳聚糖溶液1～10份、蜂胶提取液1～10份、纳他霉素0.01～0.05份和水30～50份；所述微生物发酵液为酵母菌发酵液。
2.根据权利要求1所述一种果蔬类复合生物保鲜剂，其特征在于，按体积份计，包括以下成分：微生物发酵液50份、柑橘皮提取液10份、冬凌草提取液5份、壳聚糖溶液5份、蜂胶提取液5份、纳他霉素0.02份和水30份。
3.根据权利要求1所述一种果蔬类复合生物保鲜剂，其特征在于，所述酵母菌发酵液的培养方法为：
a、活化：将酵母菌接种于nyda平板培养基中，30℃培养16-20小时，重复传代2次；
b、培养：nydb液体培养基中接种活化好的酵母菌，150r/min，30℃培养22小时；
c、离心分离：酵母菌培养液7000r/min离心10min，弃去上清液，无菌水冲洗3次，血球计数板调节浓度为1×106-1×109个/ml的菌悬液，即可。
4.根据权利要求3所述一种果蔬类复合生物保鲜剂，其特征在于，所述酵母菌为以质量比为1:1混合的间型假丝酵母菌和罗伦隐球酵母菌。
5.根据权利要求1所述一种果蔬类复合生物保鲜剂，其特征在于，所述柑橘皮提取液的提取方法为：将柑橘皮粉碎，放入乙醇溶液中浸泡，然后采用微波浸提，再加入活性炭进行脱色，过滤，即得柑橘皮提取液。
6.根据权利要求1所述一种果蔬类复合生物保鲜剂，其特征在于，所述冬凌草提取液的提取方法为：将冬凌草用中药粉碎机粉碎，放入乙醇溶液中浸泡，采用微波处理，然后转入回流装置进行回流反应，再加入活性炭脱色，过滤，即得冬凌草提取液。
7.根据权利要求1所述一种果蔬类复合生物保鲜剂，其特征在于，所述蜂胶提取液的提取方法为：将蜂胶置于0℃下冷冻，粉碎，然后加入乙醇溶液，浸泡24小时以上，摇荡过滤，即得蜂胶提取液。
8.如权利要求1至权利要求7任一所述一种果蔬类复合生物保鲜剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将壳聚糖加入到柠檬酸中进行加热充分溶解，即得微酸、溶解状态的壳聚糖溶液；然后加入微生物发酵液、柑橘皮提取液，冬凌草提取液和蜂胶提取液，搅拌混匀；最后加入纳他霉素和水，混匀，即可。
技术总结
本发明公开了一种果蔬类复合生物保鲜剂及其制备方法，属于食品保鲜技术领域。其成分包括：微生物发酵液、柑橘皮提取液、冬凌草提取液、壳聚糖溶液、蜂胶提取液、纳他霉素和水。其制备方法为：将壳聚糖加入柠檬酸后，加热溶解；加入微生物发酵液、柑橘皮提取液、冬凌草提取液和蜂胶提取液，搅拌混匀；加入纳他霉素和水，再混匀，即可。本发明的果蔬类复合生物保鲜剂以微生物发酵液和天然植物提取液为主要原料，具有安全无毒、高效广谱、成本低廉、使用方便等优点，本发明的制备方法操作简单，能显著降低各类果蔬的腐烂、失水、变味等现象，延长了果蔬的贮藏期和货架期，具有广泛的应用价值。
技术研发人员：吴力克;税朝毅;罗赛
受保护的技术使用者：四川玉露春回生物科技有限公司
技术研发日：.11.28
技术公布日：.02.21
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