本发明属于禽类养殖领域，具体涉及一种三孢布拉霉饲料添加剂及其应用，尤其涉及一种可提高产蛋率、降低料蛋比、提高蛋着色度的三孢布拉霉饲料添加剂及其应用。
背景技术：
禽类蛋的蛋白是优质蛋白质，富含人体必需氨基酸，同时含有各种脂肪酸、磷脂以及各种维生素矿物质，营养丰富。而蛋黄的颜色是影响消费者接受度的一个重要指标，人们普遍认为更深色度的蛋黄具有更好的质量和健康性。所以在规模化养殖中需额外在饲养日粮中添加一些类胡萝卜素，通过禽类这个天然转化器来提高产蛋的蛋黄色度，满足营养与消费感受。另外，禽类的产蛋率和料蛋比是描述禽类生产性能比较重要的两个指标，直接关系到集约化养殖禽类的经济效益，因此值得重视。
cn103768434a公开了一种提高蛋鸡产蛋率的中药及其制备方法，中药各原料药材包括：刺五加，枸杞子，黄芪，蕨麻，芦竹根，穿心草，鹿茸，红花，乌毛蕨贯众，益母草，山楂，鸡根，五味子，龙眼肉，补骨脂，刺龙牙和夏天无。通过将该中药饲料添加剂以1％-2％的比例，添加到传统的饲料中，能够显著提高蛋鸡的产蛋率，还能够显著改善平均蛋重、蛋黄指数、蛋黄百分率和料蛋比等产蛋性能。
cn110169493a公开了一种增加鸡蛋蛋黄色泽等级和提高蛋鸡产蛋率的安全性饲料及其制备方法。由以下重量份数的组分制成：玉米40-65份，豆粕8-20份，玉米蛋白粉5-12份，次粉3-10份，棉籽粕5-10份，菜籽粕3-6份，石粉2-6份，磷酸氢钙3-10份，大豆油0.5-1.5份，微量元素0.5-1.2份，维生素0.5-1.2份，食盐0.2-0.4份，氨基酸0.1-0.3份，增色剂2-4份。该饲料在提供蛋鸡生命活动必须营养物质的基础上，应用天然增色剂，提高蛋黄颜色等级，改善鸡蛋品质，同时，提高蛋鸡产蛋率，增加养殖利润，具有很好的应用前景。
cn106036177a公开了一种提高产蛋率鸡饲料添加剂，由下列重量份的原料制成：柿子皮30-35、牛奶20-25、大麦芽10-15、泡菜15-20、紫苏油粕30-40、葡萄籽4-5、小茴香9-11、蛋黄5-10、淡奶油7-12、白砂糖15-20、洋菜20-25、杜仲4-5、食盐4-5、乳酸菌、水适量。该发明能提高产蛋率，配合饲料能够大大的提高蛋鸡的产蛋率，并且能够有效的提高鸡蛋的质量。
现有技术中关于干菌体饲料添加剂在饲料中的应用还比较有限，尤其是利用三孢布拉霉菌作为饲料添加剂的方案更为有限，因此，开发出一种新饲料添加剂及其应用是非常有意义的。
技术实现要素：
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种三孢布拉霉饲料添加剂及其应用。
为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
一方面，本发明提供一种三孢布拉霉饲料添加剂，所述三孢布拉霉饲料添加剂包括破壁的三孢布拉霉干菌体，所述三孢布拉霉干菌体中含有β-胡萝卜素和/或番茄红素。
本发明创造性地发现，将含有一定比例β-胡萝卜素和番茄红素的三孢布拉霉添加剂添加入禽类饲料中，可以显著地提高禽类蛋的蛋黄色度，提高禽类产蛋率，同时降低料蛋比。
三孢布拉霉，属于毛霉目、笄霉科，拉丁名是blakesleatrispora，三孢布拉霉菌丝体生长迅速，能生长成粗壮的长菌丝，为长管单细胞，无隔膜，具有多个细胞核，不能产生假根，为单细胞低等真菌，其细胞含有丰富的纤维素、蛋白质成分。因此，相较于已制成成品的β-胡萝卜素和番茄红素粉(粉是指的包埋处理后的β-胡萝卜素和番茄红素粉末)，本发明所涉及的三孢布拉霉干菌体中还含有丰富的蛋白质和纤维素等成分，能够为禽类提供丰富且不同的营养物质。
优选地，所述β-胡萝卜素和番茄红素的质量比为8:1-1:3，例如8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1、5:3、1:1、5:6、1:2或1:3等，优选5:3-5:6。
当所述三孢布拉霉饲料添加剂中β-胡萝卜素和番茄红素的质量比在8:1-1:3范围时，能使提高禽类蛋蛋黄色度、提高禽类产蛋率、降低料蛋比的有益效果更佳突出，其中，5:3-5:6是一个效果更优的范围。
本发明中，为了使得三孢布拉霉饲料添加剂中的β-胡萝卜素和番茄红素的质量比在所述范围内，既能够直接采用发酵得到的同时含有β-胡萝卜素和番茄红素在此范围内的三孢布拉霉干菌体，也能够通过人为配置不同比例含量的三孢布拉霉干菌体得到本发明所需要的范围。
优选地，所述β-胡萝卜素和番茄红素在所述三孢布拉霉饲料添加剂中的质量百分含量为3-8％，例如3％、4％、4.5％、5％、6％、7％或8％等。
所述类胡萝卜素在饲料添加剂中的质量百分含量也是影响其效果的重要因素，若超过上述质量百分含量，所述饲料添加剂的有益效果不会有明显的提升反而增加成本，若不及上述质量百分含量则会对蛋品质造成影响。
优选地，所述三孢布拉霉饲料添加剂中还含有填充剂。
优选地，所述填充剂包括麦芽糊精、环糊精、淀粉或大米蛋白等。其添加量在7-50％之间。
在本发明中，所述三孢布拉霉干菌体的制备方法包括如下步骤：
(1)将三孢布拉氏霉菌进行斜面培养；
(2)将步骤(1)得到的三孢布拉氏霉菌进行种子培养，得到三孢布拉氏霉菌种子液；
(3)将步骤(2)得到的三孢布拉氏霉菌种子液进行发酵培养，得到发酵液；
(4)将步骤(3)中得到的发酵液干燥、菌体破壁，得到所述破壁的三孢布拉霉干菌体。
优选地，步骤(1)所述将三孢布拉氏霉菌进行斜面培养的方法为：取三孢布拉氏霉菌正菌和三孢布拉氏霉菌负菌悬液，分别涂布于pda斜面培养基上，恒温培养，得到三孢布拉氏霉菌正菌液和三孢布拉氏霉菌负菌液。
所述pda培养基的配制方式为：将土豆切成1cm方块加入去离子水煮沸30min，冷却后用四层纱布过滤，取过滤后的清液加入葡萄糖和琼脂粉，共包括葡萄糖20g/l，琼脂粉25g/l，去皮土豆200g/l。
优选地，所述恒温培养的温度为20-30℃，例如20℃、25℃、26℃、27℃、28℃、29℃或30℃等。
优选地，所述恒温培养的时间为5-7天，例如5天、6天或7天。
优选地，步骤(2)所述种子培养的方法为：取步骤(1)得到的三孢布拉氏霉菌正菌液和负菌液，分别接种于种子培养基中培养，得到三孢布拉氏霉菌正菌种子液和三孢布拉氏霉菌负菌种子液。
优选地，所述种子培养基包括葡萄糖2-4％、黄豆饼粉0.5-2％、酵母粉1-4％、磷酸二氢钾0.7-1％、硫酸镁0.01-0.02％和葵花籽油4-8％。
所述葡糖糖在种子培养基中的质量百分含量可以为2％、2.5％、3％、3.5％或4％等。
所述黄豆饼粉在种子培养基中的质量百分含量可以为0.5％、0.8％、1％、1.2％、1.5％、1.8％或2％等。
所述酵母粉在种子培养基中的质量百分含量可以为1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％或4％等。
所述磷酸二氢钾在种子培养基中的质量百分含量可以为0.7％、0.8％、0.9％或1％等。
所述硫酸镁在种子培养基中的质量百分含量可以为0.01％、0.012％、0.014％、0.016％、0.018％或0.02％等。
所述葵花籽油在种子培养基中的质量百分含量可以为4％、5％、6％、7％或8％等。
优选地，所述培养的温度为20-30℃，例如20℃、25℃、26℃、27℃、28℃、29℃或30℃等。
优选地，所述培养的时间为40-50h，例如40h、41h、42h、43h、44h、45h、46h、48h或50h等。
优选地，所述培养在摇床振摇下进行，转速为200-250r/min，例如200r/min、210r/min、220r/min、230r/min、240r/min或250r/min等。
优选地，所述培养时的通气量为1.2-1.8vvm，例如1.2vvm、1.3vvm、1.4vvm、1.5vvm、1.6vvm、1.7vvm或1.8vvm等。
优选地，步骤(3)所述发酵培养的方法为：将步骤(2)得到的三孢布拉氏霉菌正菌种子液和三孢布拉氏霉菌负菌种子液混合后接种于发酵培养基中培养。
优选地，所述三孢布拉氏霉菌正菌种子液和三孢布拉氏霉菌负菌种子液的质量比为1:5-1:8，例如1:5、1:6、1:7或1:8等。
优选地，所述发酵培养基包括葡萄糖2-4％、黄豆饼粉0.5-2％、酵母粉1-4％、磷酸二氢钾0.7-1％、硫酸镁0.01-0.02％和葵花籽油4-8％。
所述发酵培养基中的黄豆饼粉和酵母粉提供微生物发酵的氮源，还可以通过添加氨水和/或尿素来补料调节。
当采取补料措施时，会降低整体成分中蛋白质的含量。相对于补料措施，不补料的措施得到的饲料添加剂中营养物质更丰富，效果更好。
优选地，不采取补料措施时，所述黄豆饼粉在发酵培养基中的质量百分含量可以1.5-2％，例如1.5％、1.6％、1.7％、1.8％、1.9％或2％等。
优选地，不采取补料措施时，所述酵母粉在发酵培养基中的质量百分含量可以3-4％，例如3％、3.2％、3.4％、3.5％、3.6％、3.8％或4％等。
所述葡糖糖在发酵培养基中的质量百分含量可以为2％、2.5％、3％、3.5％或4％等。
所述黄豆饼粉在发酵培养基中的质量百分含量可以为0.5％、0.8％、1％、1.2％、1.5％、1.8％或2％等。
所述酵母粉在发酵培养基中的质量百分含量可以为1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％或4％等。
所述磷酸二氢钾在发酵培养基中的质量百分含量可以为0.7％、0.8％、0.9％或1％等。
所述硫酸镁在发酵培养基中的质量百分含量可以为0.01％、0.012％、0.014％、0.016％、0.018％或0.02％等。
所述葵花籽油在发酵培养基中的质量百分含量可以为4％、5％、6％、7％或8％等。
优选地，所述发酵培养基中黄豆饼分含量为1.5-2.0％。
优选地，所述发酵培养的温度为20-30℃，例如20℃、25℃、26℃、27℃、28℃、29℃或30℃等。
优选地，所述发酵培养的时间为100-150h，例如100h、110h、115h、120h、125h、130h、135h、140h或150h等。
优选地，所述发酵培养在摇床振摇下进行，转速为100-200r/min，例如100r/min、120r/min、150r/min、160r/min、180r/min或200r/min等。
优选地，所述发酵培养环境的ph值为6.5-7.5，例如6.5、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2或7.5等。
优选地，步骤(3)所述发酵培养过程中还可以添加阻断剂，所述阻断剂可以是咪唑、烟碱、吡啶或茶碱等。
优选地，所述阻断剂为咪唑，添加量为0.2-1.2g/l，例如0.2g/l、0.3g/l、0.4g/l、0.5g/l、0.6g/l、0.65g/l、0.7g/l、0.75g/l、0.8g/l、1.0g/l或1.2g/l等。进一步优选地，咪唑的添加量为0.6-0.8g/l。
优选地，所述阻断剂的添加时间为发酵培养开始后18-72h，例如18h、20h、25h、30h、36h、40h、44h、50h、55h、60h、68h、70h或72h等，优选30-50h。
优选地，如果要得到高含量的番茄红素，在发酵过程中可以根据生物量适当补充阻断剂，补充的阻断剂可按照20-30mg/dcw进行添加。
本发明还创造性地发现将三孢布拉霉菌发酵，并通过在发酵阶段调节阻断剂(包括阻断剂的添加量和添加时间)的工艺，可以获得含有不同质量比的β-胡萝卜素和/或番茄红素的发酵液。
例如在18-30h内添加阻断剂，并在发酵过程中补充阻断剂可得到β-胡萝卜素和番茄红素在2:3-1:3之间；
在30-36h内添加阻断剂，可控制β-胡萝卜素和番茄红素比例在1:1-2:3之间；
在36-44h内添加阻断剂，可控制β-胡萝卜素和番茄红素比例在3:2-1:1的范围之内；
在44-50h内添加阻断剂，可控制β-胡萝卜素和番茄红素比例在2:1-3:2的范围之内；
在50-60h内添加阻断剂，可控制β-胡萝卜素和番茄红素比例在4:1-2:1的范围之内；
60h之后添加阻断剂，可得到β-胡萝卜素比例更高的产物。60-72h添加可控制β-胡萝卜素和番茄红素比例可达到8:1。
阻断剂的添加量影响发酵最后的生物量，只有将其控制在较好的范围内，与添加时间相配合，才能既使番茄红素能够按照设定比例产出，又使得三孢布拉霉的生长代谢受到较小影响。
通过本方法中发酵得到的生物量在30-55g/l，例如30g/l、32g/l、35g/l、38g/l、40g/l、42g/l、45g/l、50g/l、55g/l等。
优选地，步骤(4)所述干燥可以是直接将发酵液干燥，还可以是将发酵液过滤后干燥。所述过滤可选择板框压滤，所述干燥可以是真空干燥、真空冷冻干燥、沸腾干燥。
优选地，步骤(4)所述破壁可以是完全破壁也可以是部分破壁，其中部分破壁可以是细胞壁部分出现破坏而细胞膜完整的状态，具体可见专利cn10988763.4。破壁方法可以是干法破壁、酶法破壁、酸法或碱法破壁。
在某一具体实施方式中，可以先将三孢布拉霉干菌体采用干法破壁机(如球磨机)处理20-30min，再进行粉碎整粒，使颗粒99％过100目以上(如120目)的筛网。通过此制备方法得到的干菌体的破壁率达95％以上，则干菌体中的β-胡萝卜素和番茄红素能充分释放出来。
此处将三孢布拉霉干菌体进行破壁是因为破壁的干菌体更有利于禽类的吸收转化。由于干菌体细胞壁厚实，不经任何处理，所需的有效成分在禽类(例如鸡)体内难以释出，导致吸收效率低，所以相较于直接使用三孢布拉霉干菌体，破壁后的干菌体能够提高禽类吸收率。
优选地，步骤(4)还包括将破壁的三孢布拉霉干菌体与填充剂相混合。
另一方面，本发明还涉及三孢布拉霉饲料添加剂在动物养殖中的应用，优选为禽类饲养中的应用。
本发明提供的三孢布拉霉饲料添加剂可用在动物养殖中，所述动物包括但不限于常见的畜禽，偶蹄目下的包括猪、牛、羊等，禽类动物如鸡、鸭、鹅等，三孢布拉霉中所含有的类胡萝卜素能够起到提高免疫力、抗炎症、抗氧化的作用。
另一方面，本发明还提供一种饲料，所述饲料包括如上所述的三孢布拉霉饲料添加剂。
优选地，所述三孢布拉霉饲料添加剂在饲料中的添加量为60-1000mg/kg，例如60mg/kg、80mg/kg、100mg/kg、150mg/kg、200mg/kg、250mg/kg、300mg/kg、400mg/kg或1000mg/kg等。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
本发明创造性地发现，将含有β-胡萝卜素和/或番茄红素的三孢布拉霉干菌体作为添加剂添应用于禽类饲养，添加入禽类饲料中，相较于已制成成品的β-胡萝卜素和番茄红素粉(粉是指的包埋处理后的β-胡萝卜素和番茄红素粉末)，本发明所涉及的三孢布拉霉干菌体中还含有丰富的蛋白质和纤维素等成分，能够为禽类提供丰富且不同的营养物质，在蛋鸡的饲养实验中显示，不仅可以显著地提高禽类蛋的蛋黄色度至11.0-12.8，提高禽类产蛋率至91.4％-94.4％，同时降低料蛋比至1.91-2.00。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
实施例1
本实施例提供一种三孢布拉霉饲料添加剂，所述三孢布拉霉饲料添加剂为破壁的三孢布拉霉干菌体，所述三孢布拉霉饲料添加剂中含有质量比为5:3的β-胡萝卜素和番茄红素，β-胡萝卜素和番茄红素在干菌体中的含量为4.9％。
制备方法为：
(1)取三孢布拉氏霉菌正菌和三孢布拉氏霉菌负菌悬液，分别涂布于pda斜面培养基上，在25℃下恒温培养6天，得到三孢布拉氏霉菌正菌和三孢布拉氏霉菌负菌；
(2)取步骤(1)得到的三孢布拉氏霉菌正菌和负菌，分别接种于种子培养基中在25℃、220r/min摇床振摇下培养48h，得到三孢布拉氏霉菌正菌种子液和负菌种子液；所述种子培养基为：葡萄糖3％、黄豆饼粉1.5％、酵母粉3％、磷酸二氢钾0.7％、硫酸镁0.01％和葵花籽油4％。
(3)将步骤(2)得到的三孢布拉氏霉菌正菌种子液和负菌种子液以质量比为1:6混合后接种于发酵培养基中在25℃、ph值为7.0、180r/min摇床振摇下培养120h。在发酵开始后30h向发酵液中添加0.7g/l的咪唑，得到发酵液；所述发酵培养基包括葡萄糖3％、黄豆饼粉1.5％、酵母粉3％、磷酸二氢钾0.7％、硫酸镁0.01％和葵花籽油4％。
(4)将步骤(3)得到的发酵液用板框过滤得到湿菌体，湿菌体经沸腾干燥得到三孢布拉霉干菌体，然后将干菌体采用干法破壁处理25min，再进行粉碎整粒，使颗粒99％过120目筛，即得。
实施例2
本实施例提供一种三孢布拉霉饲料添加剂，所述三孢布拉霉饲料添加剂包括破壁的三孢布拉霉干菌体，所述三孢布拉霉饲料添加剂中含有质量比为5:6的β-胡萝卜素和番茄红素，β-胡萝卜素和番茄红素在干菌体中的含量为5.4％。
其制备方法为：
(1)取三孢布拉氏霉菌正菌和三孢布拉氏霉菌负菌悬液，分别涂布于pda斜面培养基上，在25℃下恒温培养6天，得到三孢布拉氏霉菌正菌和三孢布拉氏霉菌负菌；
(2)取步骤(1)得到的三孢布拉氏霉菌正菌和负菌，分别接种于种子培养基中在30℃、200r/min摇床振摇下培养40h，得到三孢布拉氏霉菌正菌种子液和负菌种子液；所述种子培养基为：葡萄糖3％、黄豆饼粉1.5％、酵母粉3％、磷酸二氢钾0.7％、硫酸镁0.01％和葵花籽油4％。
(3)将步骤(2)得到的三孢布拉氏霉菌正菌种子液和负菌种子液以质量比为1:8混合后接种于发酵培养基中在25℃、ph值为7.0、200r/min摇床振摇下培养120h。在发酵开始后44h向发酵液中添加0.7g/l的咪唑，得到发酵液；所述发酵培养基包括葡萄糖3％、黄豆饼粉1.5％、酵母粉3％、磷酸二氢钾0.7％、硫酸镁0.01％和葵花籽油4％。
(4)将步骤(3)得到的发酵液用板框过滤得到湿菌体，湿菌体经沸腾干燥得到三孢布拉霉干菌体，然后将干菌体采用干法破壁机处理25min，再进行粉碎整粒，使颗粒99％过120目筛，即得。
实施例3
本实施例提供一种三孢布拉霉饲料添加剂，所述三孢布拉霉饲料添加剂包括破壁的三孢布拉霉干菌体，所述三孢布拉霉饲料添加剂中含有质量比为8:1的β-胡萝卜素和番茄红素，β-胡萝卜素和番茄红素在干菌体中的含量为5.0％。
其制备方法为：
(1)取三孢布拉氏霉菌正菌和三孢布拉氏霉菌负菌悬液，分别涂布于pda斜面培养基上，在25℃下恒温培养6天，得到三孢布拉氏霉菌正菌和三孢布拉氏霉菌负菌；
(2)取步骤(1)得到的三孢布拉氏霉菌正菌和负菌，分别接种于种子培养基中在20℃、220r/min摇床振摇下培养50h，得到三孢布拉氏霉菌正菌种子液和负菌种子液；所述种子培养基为：葡萄糖3％、黄豆饼粉1.5％、酵母粉3％、磷酸二氢钾0.7％、硫酸镁0.01％和葵花籽油4％。
(3)将步骤(2)得到的三孢布拉氏霉菌正菌种子液和负菌种子液以质量比为1:5混合后接种于发酵培养基中在25℃、ph值为7.2、200r/min摇床振摇下培养120h，在发酵开始后70h向发酵液中添加0.7g/l的咪唑，得到发酵液；所述发酵培养基包括葡萄糖3％、黄豆饼粉1.5％、酵母粉3％、磷酸二氢钾0.7％、硫酸镁0.01％和葵花籽油4％。
(4)将步骤(3)得到的发酵液用板框过滤得到湿菌体，湿菌体经沸腾干燥得到三孢布拉霉干菌体，将干菌体采用干法破壁机处理25min，再进行粉碎整粒，使颗粒99％过120目筛，即得。
实施例4
本实施例提供一种三孢布拉霉饲料添加剂，所述三孢布拉霉饲料添加剂包括破壁的三孢布拉霉干菌体，所述三孢布拉霉饲料添加剂中含有质量比为1:3的β-胡萝卜素和番茄红素，β-胡萝卜素和番茄红素在干菌体中的含量为4.8％。
其制备方法为：
(1)取三孢布拉氏霉菌正菌和三孢布拉氏霉菌负菌悬液，分别涂布于pda斜面培养基上，在25℃下恒温培养6天，得到三孢布拉氏霉菌正菌和三孢布拉氏霉菌负菌；
(2)取步骤(1)得到的三孢布拉氏霉菌正菌和负菌，分别接种于种子培养基中在20℃、220r/min摇床振摇下培养50h，得到三孢布拉氏霉菌正菌种子液和负菌种子液；所述种子培养基为：葡萄糖3％、黄豆饼粉1.5％、酵母粉3％、磷酸二氢钾0.7％、硫酸镁0.01％和葵花籽油4％。
(3)将步骤(2)得到的三孢布拉氏霉菌正菌种子液和负菌种子液以质量比为1:5混合后接种于发酵培养基中在25℃、ph值为7.2、200r/min摇床振摇下培养120h。在发酵开始后20h向发酵液中添加0.7g/l的咪唑，得到发酵液；所述发酵培养基包括葡萄糖3％、黄豆饼粉1.5％、酵母粉3％、磷酸二氢钾0.7％、硫酸镁0.01％和葵花籽油4％。
(4)将步骤(3)得到的发酵液用板框过滤得到湿菌体，湿菌体经沸腾干燥得到三孢布拉霉干菌体，将干菌体采用干法破壁机处理25min，再进行粉碎整粒，使颗粒99％过120目筛，即得。
实施例5
本实施例提供一种三孢布拉霉饲料添加剂，所述三孢布拉霉饲料添加剂包括破壁的三孢布拉霉干菌体，所述三孢布拉霉饲料添加剂中含有质量比为9:1的β-胡萝卜素和番茄红素，β-胡萝卜素和番茄红素在干菌体中的含量为4.8％。
制备方法为：
(1)取三孢布拉氏霉菌正菌和三孢布拉氏霉菌负菌悬液，分别涂布于pda斜面培养基上，在25℃下恒温培养6天，得到三孢布拉氏霉菌正菌和三孢布拉氏霉菌负菌；
(2)取步骤(1)得到的三孢布拉氏霉菌正菌和负菌，分别接种于种子培养基中在20℃、220r/min摇床振摇下培养50h，得到三孢布拉氏霉菌正菌种子液和负菌种子液；所述种子培养基为：葡萄糖3％、黄豆饼粉1.5％、酵母粉3％、磷酸二氢钾0.7％、硫酸镁0.01％和葵花籽油4％。
(3)将步骤(2)得到的三孢布拉氏霉菌正菌种子液和负菌种子液以质量比为1:5混合后接种于发酵培养基中在25℃、ph值为7.2、200r/min摇床振摇下培养120h，在发酵开始后72h向发酵液中添加0.7g/l的咪唑，得到发酵液；所述发酵培养基包括葡萄糖3％、黄豆饼粉1.5％、酵母粉3％、磷酸二氢钾0.7％、硫酸镁0.01％和葵花籽油4％。
(4)将步骤(3)得到的发酵液用板框过滤得到湿菌体，湿菌体经沸腾干燥得到三孢布拉霉干菌体，将干菌体采用干法破壁机处理25min，再进行粉碎整粒，使颗粒99％过120目筛，即得。
实施例6
本实施例提供一种三孢布拉霉饲料添加剂，所述三孢布拉霉饲料添加剂包括破壁的三孢布拉霉干菌体，所述三孢布拉霉饲料添加剂中含有质量比为1:5的β-胡萝卜素和番茄红素，β-胡萝卜素和番茄红素在干菌体中的含量为5.1％。
其制备方法为：
(1)取三孢布拉氏霉菌正菌和三孢布拉氏霉菌负菌悬液，分别涂布于pda斜面培养基上，在25℃下恒温培养6天，得到三孢布拉氏霉菌正菌和三孢布拉氏霉菌负菌；
(2)取步骤(1)得到的三孢布拉氏霉菌正菌和负菌，分别接种于种子培养基中在20℃、220r/min摇床振摇下培养50h，得到三孢布拉氏霉菌正菌种子液和负菌种子液；所述种子培养基为：葡萄糖3％、黄豆饼粉1.5％、酵母粉3％、磷酸二氢钾0.7％、硫酸镁0.01％和葵花籽油4％。
(3)将步骤(2)得到的三孢布拉氏霉菌正菌种子液和负菌种子液以质量比为1:5混合后接种于发酵培养基中在25℃、ph值为7.2、200r/min摇床振摇下培养120h，在发酵开始后18h向发酵液中添加0.7g/l的咪唑，得到发酵液；所述发酵培养基包括葡萄糖3％、黄豆饼粉1.5％、酵母粉3％、磷酸二氢钾0.7％、硫酸镁0.01％和葵花籽油4％。
(4)将步骤(3)得到的发酵液用板框过滤得到湿菌体，湿菌体经沸腾干燥得到三孢布拉霉干菌体，与环糊精以20:1的比例进行混合后。然后将干菌体采用干法破壁机处理25min，再进行粉碎整粒，使颗粒99％过120目筛，即得。
实施例7
本实施例提供一种三孢布拉霉饲料添加剂，所述三孢布拉霉饲料添加剂为破壁的三孢布拉霉干菌体，所述三孢布拉霉干菌体中含有质量比为5:3的β-胡萝卜素和番茄红素，β-胡萝卜素和番茄红素在干菌体中的含量为6.5％。
制备方法为：
(1)取三孢布拉氏霉菌正菌和三孢布拉氏霉菌负菌悬液，分别涂布于pda斜面培养基上，在25℃下恒温培养6天，得到三孢布拉氏霉菌正菌和三孢布拉氏霉菌负菌；
(2)取步骤(1)得到的三孢布拉氏霉菌正菌和负菌，分别接种于种子培养基中在25℃、220r/min摇床振摇下培养48h，得到三孢布拉氏霉菌正菌种子液和负菌种子液；所述种子培养基为：葡萄糖3％、黄豆饼粉0.5％、酵母粉1.5％、磷酸二氢钾0.7％、硫酸镁0.01％和葵花籽油4％。
(3)将步骤(2)得到的三孢布拉氏霉菌正菌种子液和负菌种子液以质量比为1:6混合后接种于发酵培养基中在25℃、ph值为7.0、180r/min摇床振摇下培养120h，发酵过程中采用氨水补充氮源。在发酵开始后30h向发酵液中添加0.7g/l的咪唑，得到发酵液；所述发酵培养基包括葡萄糖3％、黄豆饼粉1.5％、酵母粉3％、磷酸二氢钾0.7％、硫酸镁0.01％和葵花籽油4％。
(4)将步骤(3)得到的发酵液直接真空冷冻干燥，再采用干法破壁处理25min，再进行粉碎整粒，使颗粒99％过120目筛，即得。
实施例8
本实施例提供一种三孢布拉霉饲料添加剂，所述三孢布拉霉饲料添加剂为破壁的三孢布拉霉干菌体，所述三孢布拉霉干菌体中含有质量比为5:3的β-胡萝卜素和番茄红素，β-胡萝卜素和番茄红素在干菌体中的含量为6.5％。
本实施例与实施例1相同，不同之处在于(4)将步骤(3)得到的发酵液直接真空冷冻，再采用干法破壁处理25min，再进行粉碎整粒，使颗粒99％过120目筛，即得。
实施例9
本实施例提供一种三孢布拉霉饲料添加剂，所述三孢布拉霉饲料添加剂为破壁的三孢布拉霉干菌体，所述三孢布拉霉干菌体中含有质量比为5:3的β-胡萝卜素和番茄红素，β-胡萝卜素和番茄红素在干菌体中的含量为4.9％。
其制备方法为：
本实施例制备一种仅含有β-胡萝卜素的三孢布拉霉干菌体和一种仅含有番茄红素的三孢布拉霉干菌体。
发酵条件与后处理方法实施例1的不同之处分别在于：制备仅含有β-胡萝卜素的三孢布拉霉菌体发酵过程中不添加阻断剂，β-胡萝卜素含量为5％；制备仅含有番茄红素的三孢布拉霉发酵过程中添加阻断剂的时间为18h，添加量为1.0g/l，发酵过程中根据生物量的增长可适当补充阻断剂，得到仅含有番茄红素的三孢布拉霉菌体，番茄红素的含量为4％。过滤干燥后将两种三孢布拉霉菌体按照4:3的比例混合即可得到三孢布拉霉饲料添加剂，干菌体中含有质量比为5:3的β-胡萝卜素和番茄红素。
实施例10
本实施例提供一种饲料添加剂，所述饲料添加剂为破壁的三孢布拉霉干菌体，所述三孢布拉霉干菌体中仅含有β-胡萝卜素，所述β-胡萝卜素在所述三孢布拉霉饲料添加剂中的质量百分含量为4％。其制备方法与实施例1的区别仅在于步骤(3)不添加阻断剂。
实施例11
本实施例提供一种饲料添加剂，所述饲料添加剂为破壁的三孢布拉霉干菌体，所述三孢布拉霉干菌体中仅含有番茄红素，所述β-胡萝卜素在所述三孢布拉霉饲料添加剂中的质量百分含量为4％。其制备方法与实施例1的区别仅在于步骤(3)中在18h时添加阻断剂，阻断剂的添加量为1.0g/l，发酵过程中检测生物量进行阻断剂的补加。
对比例1
本对比例提供一种饲料添加剂，所述饲料添加剂由β-胡萝卜素粉和番茄红素粉以质量比1:3混合制得。其中β-胡萝卜素和番茄红素的质量百分含量为10％。
对比例2
本对比例提供一种饲料添加剂，所述饲料添加剂由β-胡萝卜素粉和番茄红素粉以质量比8:1混合制得。其中β-胡萝卜素和番茄红素的质量百分含量为10％。
对比例3
本对比例提供一种三孢布拉霉饲料添加剂，三孢布拉霉中类胡萝卜素的配比与实施例1相同，制备方法中与实施例唯一的不同在于三孢布拉霉未经过破壁处理。
实施例中的类胡萝卜素含量均为对干菌体进行完全破壁浸出处理后采用hplc方法测得，其中β-胡萝卜素的hplc检测方法参照gb5009.83-胡萝卜素的测定；番茄红素的hplc检测方法参照gb/t22249-中番茄红素的测定。
评价试验：
具体操作如下：
将230日龄体况良好、体重相近的京粉1号商品蛋鸡分为15组，每组25只，其中1组作为空白对照组，饲喂玉米-豆粕型基础日粮，其余12组在蛋鸡按时喂分别添加了实施例1-11和对比例1-3的类胡萝卜素终含量为4％的饲料添加剂的基础日粮，为达到终含量为4％，可在饲料添加剂中适量添加填充剂，例如，实施例3中可将干菌体与填充剂糊精以4:1的比例进行混合，得到类胡萝卜素终含量为4％的饲料添加剂。其中每千克基础日粮中添加500毫克饲料添加剂。对比例1-2中β-胡萝卜素粉和番茄红素粉添加200mg/kg。值得注意的是，在其他一些应用案例中，还可按照类胡萝卜素为20mg/kg日粮的添加量直接添加实施例1-11未添加填充剂的饲料添加剂。
预试期为2周，实验期为30天，实验期间做好各组数据记录，其中饲料重量每周测定一次，产蛋数和蛋重每天测定一次。蛋黄色度采用蛋黄色度采用蛋品质指标分析仪(以色列orka)每日抽样进行测定，结果取其平均值。
计算公式如下：
产蛋率＝产蛋数/鸡数；
料蛋比＝(饲料添加量-剩余量)/蛋重；
结果如表1所示。
表1
由表1数据可知：
(1)破壁与未破壁的三孢布拉霉干菌体效果差异显著性非常大。
(2)与只有单一的类胡萝卜素相比，同时含有β-胡萝卜素和番茄红素的三孢布拉霉干菌体具有更好的效果。
(3)β-胡萝卜素和番茄红素的质量比是影响添加剂有益效果的重要因素，当质量比在更优范围内，其着色度、产蛋率、料蛋比方面均能达到更好的效果。
(4)发酵液采用直接干燥时，发酵液中所富含的蛋白、葡萄糖等物质使得添加剂中的营养更为丰富，也使得添加剂在产蛋率和料蛋比方面稍显优势。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的一种三孢布拉霉饲料添加剂及其应用，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
技术特征：
1.一种三孢布拉霉饲料添加剂，其特征在于，所述三孢布拉霉饲料添加剂包括破壁的三孢布拉霉干菌体，所述三孢布拉霉干菌体中含有β-胡萝卜素和/或番茄红素。
2.如权利要求1所述的三孢布拉霉饲料添加剂，其特征在于，所述β-胡萝卜素和番茄红素的质量比为8:1-1:3，优选5:3-5:6。
3.如权利要求1或2所述的三孢布拉霉饲料添加剂，其特征在于，所述β-胡萝卜素和番茄红素在所述三孢布拉霉饲料添加剂中的质量百分含量为3-8％。
4.如权利要求1-3中任一项所述的三孢布拉霉饲料添加剂，其特征在于，所述破壁的三孢布拉霉干菌体的制备方法包括如下步骤：
(1)将三孢布拉氏霉菌进行斜面培养；
(2)将步骤(1)得到的三孢布拉氏霉菌进行种子培养，得到三孢布拉氏霉菌种子液；
(3)将步骤(2)得到的三孢布拉氏霉菌种子液进行发酵培养，得到发酵液；
(4)将步骤(3)中得到的发酵液干燥、菌体破壁，得到所述破壁的三孢布拉霉干菌体。
5.如权利要求4所述的三孢布拉霉饲料添加剂，其特征在于，步骤(1)所述将三孢布拉氏霉菌进行斜面培养的方法为：取三孢布拉氏霉菌正菌和三孢布拉氏霉菌负菌悬液，分别涂布于pda斜面培养基上，恒温培养，得到三孢布拉氏霉菌正菌和三孢布拉氏霉菌负菌；
优选地，所述恒温培养的温度为20-30℃；
优选地，所述恒温培养的时间为5-7天。
6.如权利要求4或5所述的三孢布拉霉饲料添加剂，其特征在于，步骤(2)所述种子培养的方法为：取步骤(1)得到的三孢布拉氏霉菌正菌和负菌，分别接种于种子培养基中培养，得到三孢布拉氏霉菌正菌种子液和三孢布拉氏霉菌负菌种子液；
优选地，所述种子培养基包括葡萄糖2-4％、黄豆饼粉0.5-2％、酵母粉1-4％、磷酸二氢钾0.7-1％、硫酸镁0.01-0.02％和葵花籽油4-8％；
优选地，所述培养的温度为20-30℃；
优选地，所述培养的时间为40-50h；
优选地，所述培养在摇床振摇下进行，转速为200-250r/min；
优选地，所述培养时的通气量为1.2-1.8vvm。
7.如权利要求4-6中任一项所述的三孢布拉霉饲料添加剂，其特征在于，步骤(3)所述发酵培养的方法为：将步骤(2)得到的三孢布拉氏霉菌正菌种子液和三孢布拉氏霉菌负菌种子液混合后接种于发酵培养基中培养；
优选地，所述三孢布拉氏霉菌正菌种子液和三孢布拉氏霉菌负菌种子液的质量比为1:5-1:8；
优选地，所述发酵培养基包括葡萄糖2-4％、黄豆饼粉0.5-2％、酵母粉1-4％、磷酸二氢钾0.7-1％、硫酸镁0.01-0.02％和葵花籽油4-8％；
优选地，所述发酵培养基中黄豆饼分含量为1.5-2.0％；
优选地，所述发酵培养的温度为20-30℃；
优选地，所述发酵培养的时间为100-150h；
优选地，所述发酵培养在摇床振摇下进行，转速为100-200r/min；
优选地，所述发酵培养环境的ph值为6.5-7.5。
8.如权利要求4-7中任一项所述的三孢布拉霉饲料添加剂，其特征在于，步骤(3)所述发酵培养过程中还添加阻断剂，所述阻断剂包括咪唑、烟碱、吡啶或茶碱等；
优选地，所述咪唑的添加量为0.2-1.2g/l；
优选地，所述阻断剂的添加时间为发酵培养开始后18-72h，优选30-50h。
9.如权利要求1-8中任一项所述的三孢布拉霉饲料添加剂在动物养殖中的应用，优选为禽类饲养中的应用。
10.一种饲料，其特征在于，所述饲料包括如权利要求1-8中任一项所述的三孢布拉霉饲料添加剂；
优选地，所述三孢布拉霉饲料添加剂在饲料中的添加量为60-1000mg/kg。
技术总结
本发明提供一种三孢布拉霉饲料添加剂及其应用，所述三孢布拉霉饲料添加剂包括破壁的三孢布拉霉干菌体，所述三孢布拉霉干菌体中含有β‑胡萝卜素和/或番茄红素。本发明创造性地发现，将含有β‑胡萝卜素和番茄红素的三孢布拉霉干菌体作为添加剂添加入禽类饲料中，可以显著地提高禽类蛋的蛋黄色度，提高禽类产蛋率，同时降低料蛋比。
技术研发人员：汪志明;陆姝欢;刘洋;余超;李翔宇
受保护的技术使用者：嘉必优生物技术(武汉)股份有限公司
技术研发日：.12.03
技术公布日：.02.21
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