摘要: 目的 探讨脂肪来源干细胞( ADSCs) 培养基对瘢痕成纤维细胞增殖与胶原合成的影响及其潜在机制。方法 取正常成纤维细胞( NFs) 和瘢痕成纤维细胞( HSFs) 分别用成纤维细胞培养基和添加 ADSCs 条件培养基的成纤维细胞培养基培养，实验分为 A，B，C，D 组。A 组给予 NFs 成纤维培养基( FM) 处置; B 组给予 NFs 脂肪干细胞条件培养基( ADSCs + FM) 处置; C 组给予 HSFs FM 处置; D组给予 HSFs ADSCs + FM 处置。用噻唑蓝法检测细胞增殖率，用免疫印迹法检测胶原合成和相关通路蛋白的表达情况。结果 C 组与 D 组培养 48 h 的细胞增殖率 分 别 为 ( 5. 03 ± 1. 77 ) % 和 ( 1. 54 ± 0. 71 ) % ，差异有统计学意义( P ＜ 0. 01) 。C 组与 D 组的 Ki － 67 蛋白相对表达量分别为 0. 35 ± 0. 01 和0. 14 ± 0. 01，p － p38蛋白相对表达量分别为 0. 37 ± 0. 02 和 0. 21 ± 0. 01，α － SMA分别为1. 58 ± 0. 09和 0. 93 ± 0. 07，Ⅰ型胶原分别为 0. 61 ± 0. 02 和 0. 24 ± 0. 01，Ⅲ型 胶 原 分 别 为 0. 44 ± 0. 05 和 0. 29 ± 0. 03，差异均有统计学意义 ( 均P ＜ 0. 01) 。结论 ADSCs 条件培养基抑制了瘢痕成纤维细胞增殖，其可能通过调控 p38 蛋白的磷酸化，从而缓解瘢痕成纤维细胞的增殖与纤维化。
关键词: 脂肪来源干细胞; 瘢痕成纤维细胞; 增殖; 胶原合成; p38 信号通路
DOI: 10. 13699 /j. cnki. 1001 － 6821. . 19. 034
中图分类号: Ｒ363 文献标志码: A
文章编号: 1001 － 6821( ) 19 － 3091 － 04
增生性瘢痕是以细胞外基质的异常堆积和重构为特征的一类皮肤疾病［1］。间充质干细胞在伤口愈合过程中具有阻止纤维组织形成的作用［2］。脂肪来源干细胞( ADSCs) 可通过减少胶原蛋白分布，发挥抗纤维化的作用［3］。旁分泌信号被认为是间充质干细
胞发挥各种生理和治疗效果的最主要分子机制之一［4］。本研究在体外观察 ADSCs 条件培养基对成纤维细胞增殖和胶原合成的影响，探索其治疗增生性瘢痕的可能性。
材料和方法
1 材料
组织 新鲜正常皮肤组织和增生性瘢痕组织来源于 6 例手术切除瘢痕并进行自体皮肤移植的患者，脂肪组织来源于 5 例抽脂患者。取材均来源于西南医科大学附属医院。本研究经西南医科大学伦理委
员会批准。所有患者及其家属均签署知情同意书。试剂 Ⅰ 型 胶 原 酶，美 国 Sigma 公 司 生 产;DMEM/F12 培养基、胎牛血清( FBS) ，均由美国GIBCO公司生产; 成纤维细胞培养基( FM) ，美国Sciencell 公司生产; 噻唑蓝( MTT) ，上海碧云天生物技术有限公
司生 产; 兔 抗 人 Ki － 67，α － 平滑肌肌动蛋白( α － SMA) ，Ⅰ 型 胶 原 ( Collagen Ⅰ) ，Collagen Ⅲ，p － p38，p38 单克隆抗体，均由美国 Abcam 公司生产;兔抗人 GAPDH 多克隆抗体，武汉博士德公司生产。仪器 Multiskan Sky 全波长酶标仪，美国 ThermoScientific 公司产品; Tanon － 5200Multi 化学发光凝胶
成像系统，天能公司产品; CX31 荧光倒置显微镜，日本奥林巴斯公司产品。细胞 人正常成纤维细胞( NFs) 、增生性瘢痕成
纤维细 胞( HSFs) ，均购自上海素冉生物科技有限
公司。
2 实验方法
2. 1 人 ADSCs 分离与培养［5］
脂肪组织用含青霉素和链霉素的 PBS 清洗 3 次后，加入等体积 0. 5% Ⅰ型胶原酶，放入 37 ℃ 恒温摇
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