本发明涉及利用乳酸菌（嗜酸乳杆菌、保加利亚乳酸杆菌和乳酸肠链球菌）发酵杜仲叶和枸杞子提取液的保健饮料，具体是一种乳酸菌发酵杜仲叶和枸杞子提取液饮料及其制备方法。
背景技术：
据最近有关资料报道，在中国1000万聋哑人中有60%-80%与药物不良反应有关，在中国每年有约20万人死于药物不良反应，其中滥用抗生素占40%，在中国每年5000万住院病人中约有250万人因药物不良反应入院。
为了每个家庭的未来，拒绝滥用抗生素和化学合成药品，提倡创新发展中医药和益生菌发酵中药，推广益生菌的服用刻不容缓，努力实现中医药健康养生文化的创造性转化和创新性发展。
发明人起草发明专利名称为《微生物生长促进剂及其制备方法》之前，分别在乳酸菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌标准培养基中增加1%-2%的杜仲叶和枸杞子提取物实验结果如下表：
由以上实验结果可知，乳酸菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌培养基中增加1%-2%杜仲叶和枸杞子提取物，可以使乳酸菌发酵活菌数提高103%，缩短发酵周期29%；酵母菌发酵后活菌数提高41.8%，缩短发酵周期14.8%；枯草芽孢杆菌发酵后活菌数提高57%，缩短发酵周期21%。
当时处于对发明专利的利益保护，将杜仲叶和枸杞子提取物命题为《微生物生长促进剂》，由此而后，发明人一直致力于益生菌发酵杜仲叶（同时增补杜仲皮）等系列产品的研究和开发，内容包括益生菌发酵杜仲系列动物饲料添加剂和人用保健品食品。
本发明首次利用益生菌发酵杜仲叶和枸杞子提取液制备乳酸菌保健饮料；目的在于选择药食同源的传统中药，通过益生菌生物经发酵，开辟一条益生菌发酵中药的新途径；生产两种乳酸菌保健饮料，一种是保持大量活性乳酸菌的保健饮料；另一种大量活性乳酸菌被高温灭菌后的乳酸菌素口服溶液。让古老的乳酸菌和药食同源的中药材同时焕发新生。
技术实现要素：
本发明的目的在于：选择了三种乳酸菌分别为嗜酸乳杆菌、保加利亚乳酸杆菌和乳酸肠链球菌，采用优良生产工艺设计，将药食同源的杜仲叶提取液代替纯净水，用于对标准菌种的化验、活化、筛选和强化，最后转化为生产用的试管斜面菌种。
为了实现本发明所述的优良效果，本发明的采用杜仲叶提取液的制备，严格按照中国药典购买杜仲叶，并通过以下工艺路线进行提取，定量称取杜仲叶（揉碎）按1:1加入纯净水浸润2小时，第一次按1:6加入纯净水，控制加热温度95℃-98℃加热提取1小时；第二次按1:4加入纯净水，控制加热温度95℃-98℃加热提取40分钟；合并两次提取液代替纯净水，将所购标准菌种转为正常生产用试管斜面菌种，转一级试管→转二级三角瓶杜仲叶提取液益生菌发酵种子液；枸杞子提取液的制备，定量称取符合中国药典规格的宁夏产的枸杞子，按1:1加入纯净水浸润2小时，第一次按1:6加入纯净水，控制加热温度95℃-98℃加热提取1.5小时；第二次按1:4加入纯净水，控制加热温度95℃-98℃加热提取40分钟；合并两次提取液经过滤后代替纯净水，用于制备生产用培养基溶液；枸杞子乳酸菌发酵培养基的制备，定量量取枸杞子提取液，补充蛋白胨1%-2%、牛肉膏0.3%-0.5%、氯化钠0.1%-0.3%，葡萄糖1%-3%，碳酸钙（食品级）0.5-1.0%，加热溶解于枸杞子提取液中，以2mol/l盐酸溶液和20%氢氧化钠溶液调制ph值6.5-6.8，最后补充枸杞子提取液至工艺规定的配制体积；将上述定量体积的枸杞子空白培养基分别装于耐热和耐压的容器中摇晃或搅拌均匀，设定灭菌温度115℃-121℃灭菌时间25-30分钟，自然降温或通冷却水降温至37℃-39℃，按照无菌操作要求，接入预先制备好的杜仲叶乳酸菌发酵种子液，控制接种量5%-8%，继续摇晃或搅拌均匀后（或置于电热恒温摇床培养），设定培养发酵温度37℃-39℃培养发酵18-22小时。通过观察发酵液颜色由深变浅，碳酸钙消失情况或测试发酵液ph值3.8-4.2作为判定发酵终点；将上述发酵好的乳酸菌发酵枸杞子保健饮料，再经过口感和稳定性调配，质量检验合格后定量灌装，包装入库。
优选的，所述的乳酸菌发酵杜仲叶和枸杞子提取液制备而成的纯天然乳酸菌保健饮料，具有活性乳酸菌及粗多糖、乳酸钙、甘露聚糖肽和京尼平甘酸等可控的质量指标。
优选的，通过乳酸菌发酵药食同源的杜仲叶和枸杞子提取液制备而成的新型乳酸菌保健饮料，丰富的乳酸菌可以平衡人体肠道的ph值，抑制人体肠道腐败菌的生长，增强人体肠道的免疫功能。
优选的，通过乳酸菌发酵杜仲叶和枸杞子提取液所制备的新型乳酸菌保健饮料，杜仲叶和枸杞子的营养和生物活性成分得到进一步的降解。
具体实施实例
实施例一
一、杜仲叶提取液乳酸菌发酵种子液的制备
1、杜仲叶提取液的制备：称取符合中国药典规格的杜仲叶150g（揉碎），加入150ml纯净水，拌匀浸润2小时后，再加入纯净水950ml，加热95℃-98℃提取1小时，真空抽滤分离提取液。滤渣二次加入纯净水600ml，设定加热温度95℃-98℃加热提取40分钟，真空抽滤，合并两次提取液约1500ml，如不足可将药渣合并，加大真空度直至准确获得1500ml杜仲叶提取液。将其代替纯净水，用于制备化验标准品菌种→菌种分离→筛选→活化或强化菌种（含生产用试管斜面菌种）→一级液体试管→转二级三角瓶杜仲叶提取液益生菌发酵种子液。
2、杜仲叶乳酸菌发酵种子液的制备：称取乳酸菌基本培养基配方用料和用量：蛋白胨15-20g、牛肉膏7.5g、氯化钠7.5g，葡萄糖15-20g，依次加入1000ml左右的杜仲叶提取液中，加热溶解后补充杜仲叶提取液至1500ml。
3、将上述杜仲叶提取液培养基溶液以2mol/l盐酸溶液和20%氢氧化钠溶液调制ph值6.5-6.8，分装试管斜面6ml/支*8支、一级液体试管9ml/支*16支、二级液体三角瓶150ml/只*8只。其中8支斜面试管和测试乳酸菌标准品菌种需用的二级三角瓶150ml/只*1只，另外加0.5%-1.0%碳酸钙和1.5%-2.0%营养琼脂，分装结束后分别将棉塞和防潮纸包装好（或专用瓶塞），置于电热蒸汽灭菌锅内，设定灭菌温度115℃-118℃灭菌时间25-28分钟，加琼脂的8支斜面趁热摆好斜面，凝固后与液体培养基一起置冰箱冷藏备用。
4、杜仲提取液乳酸菌种子发酵液的制备程序：按无菌操作要求进行，取标准乳酸菌菌种1支→转一级液体试管（37℃-39℃培养22h-24h）→测试活化后的活菌平皿菌落（37℃-39℃培养48h）→筛选优良菌落至一级试管（37℃-39℃培养22h-24h）→转生产用试管斜面（37℃-39℃培养22h-24h）→置冰箱冷藏备用→取冰箱冷藏斜面菌种转一级液体试管（37℃-39℃培养22h-24h）→转二级三角瓶（37℃-39℃培养22h-24h）→最后转接枸杞子提取液空白培养基发酵。
二、枸杞子提取液的制备
1、称取符合中国药典规格的宁夏产的枸杞子1500g，加入纯净水1500ml浸润2小时，再加入纯净水9000ml至不锈钢提取罐，设定加热提取温度95℃-98℃加热提取1.5小时；第二次加入纯净水6000ml，设定加热温度95℃-98℃加热提取40分钟，分离提取液；合并两次提取液约等于15000ml，最好用少量纯净水冲洗枸杞子药渣，准确补足15000ml即为15l。
2、以上述枸杞子提取液代替纯净水空白培养液的制备：称取蛋白胨15000ml*1%=150g、牛肉膏15000ml*0.5%=75g、氯化钠15000ml*0.3%=45g、葡萄糖15000ml*1%=150g、碳酸钙（食品级）15000ml*1%=150g，加热溶解于约10000ml的枸杞中提取液中，以2mol/l盐酸溶液和20%氢氧化钠溶液调制ph值6.5-6.8，最后补充枸杞中提取液至15000ml。搅拌均匀后分装于3只10000ml的短径圆底烧瓶中加塞包扎，置于电热蒸汽灭菌锅内，设定灭菌温度118℃-121℃灭菌时间25-30分钟，自然降温至37℃-39℃，按照无菌操作要求，接入预先制备好的杜仲叶乳酸菌发酵种子液，按接种量8%计算，每瓶接种400ml，加塞密封摇晃均匀置恒温培养摇床，设定培养发酵温度37℃-39℃培养发酵时间18-22小时。通过观察发酵液颜色由深变浅，碳酸钙几乎消失，测试发酵液ph值3.8-4.2即可停止发酵。
3、将上述发酵好的枸杞子提取液，置洁净区内倒入不锈钢配料容器内，进行口感和稳定性调配，抽样送检合格后定量灌装，包装入库，即为活性乳酸菌素保健饮料。
4、将上述发酵好的枸杞子提取液，置洁净区内倒入不锈钢配料容器内，进行口感和稳定性调配，定量灌装后再经加热100℃-105℃灭菌时间10-15分钟，抽样送检合格后定量灌装，包装入库，即为产品乳酸菌素口服液。
实施例二
一、杜仲叶提取液乳酸菌发酵种子液的制备
1、杜仲叶提取液的制备：称取符合中国药典规格的杜仲叶1.5kg（揉碎），加入1.5l纯净水，拌匀浸润2小时后，再加入纯净水9.5l，加热95℃-98℃提取1小时，真空抽滤分离提取液。滤渣二次加入纯净水6l，设定加热温度95℃-98℃加热提取40分钟，真空抽滤，合并两次提取液约15l，如不足可将药渣合并，加大真空度直至准确获得15l杜仲叶提取液。将其代替纯净水，用于制备化验标准品菌种→菌种分离→筛选→活化或强化菌种（含生产用试管斜面菌种）→一级液体试管→转二级三角瓶杜仲叶提取液益生菌发酵种子液。
2、杜仲叶乳酸菌发酵种子液的制备：称取乳酸菌基本培养基配方用料和用量：蛋白胨150-200g、牛肉膏75g、氯化钠75g，葡萄糖150-200g，依次加入10l左右的杜仲叶提取液中，加热溶解后补充杜仲叶提取液至15l。
3、杜仲叶提取液乳酸菌种子发酵液的制备程序：按无菌操作要求进行，取标准乳酸菌种1支→转一级液体试管（37℃-39℃培养22h-24h）→测试活化后的活菌平皿菌落（37℃-39℃培养48h）→筛选优良菌落至一级试管（37℃-39℃培养22h-24h）→转生产用试管斜面（37℃-39℃培养22h-24h）→置冰箱备用→取冰箱冷藏斜面菌种转一级液体试管（37℃-39℃培养22h-24h）→转二级三角瓶（37℃-39℃培养22h-24h）→最后转接枸杞子提取液空白培养基发酵。
二、枸杞子提取液的制备
1、称取符合中国药典规格的宁夏产的枸杞子15kg，加入纯净水15l浸润2小时，再加入纯净水90l至不锈钢提取罐，设定加热提取温度95℃-98℃加热提取1.5小时；第二次加入纯净水60l，设定加热温度95℃-98℃加热提取40分钟，分离提取液；合并两次提取液约等于150l，最后用少量纯净水冲洗枸杞子药渣，准确补足150l即为150l。
2、以上述枸杞中提取液代替纯净水空白培养液的制备：称取蛋白胨15l*1%=1.5kg、牛肉膏15l*0.5%=0.75kg、氯化钠15l*0.3%=0.45kg、葡萄糖15l*1%=0.15kg、碳酸钙食品级15l*1%=1.5kg，加热溶解于约100l的枸杞中提取液中，以2mol/l盐酸溶液和20%氢氧化钠溶液调制ph值6.5-6.8，最后补充枸
杞中提取液至150l。搅拌均匀后分装于3只100l的不锈钢发酵罐电热蒸汽灭菌，设定灭菌温度118℃-121℃灭菌时间25-30分钟，夹套通冷却水降温至37℃-39℃，按照无菌操作要求，接入预先制备好的杜仲叶乳酸菌发酵种子液，按接种量8%计算，每罐接种4l，启动搅拌，设定培养发酵温度37℃-39℃培养发酵时间18-22小时。通过观察发酵液颜色由深变浅，碳酸钙几乎消失，测试发酵液ph值3.8-4.2即可停止发酵。
3、将上述发酵好的枸杞子提取液，置洁净区内倒入不锈钢配料容器内，进行口感和稳定性调配，抽样送检合格后定量灌装，包装入库，即为活性乳酸菌素保健饮料。
4、将上述发酵好的枸杞子提取液，置洁净区内倒入不锈钢配料容器内，进行口
感和稳定性调配，定量灌装后再经加热100℃-105℃灭菌时间10-15分钟，抽样送检合格后定量灌装，包装入库，即为产品乳酸菌素口服液。
实施例三
一、杜仲叶提取液乳酸菌发酵种子液的制备
1、杜仲叶提取液的制备：称取符合中国药典规格的杜仲叶15kg（揉碎），加入15l纯净水，拌匀浸润2小时后，再加入纯净水95l，加热95℃-98℃提取1小时，真空抽滤分离提取液。滤渣二次加入纯净水60l，设定加热温度95℃-98℃加热提取40分钟，真空抽滤，合并两次提取液约150l，如不足可将药渣合并，加大真空度直至准确获得150l杜仲叶提取液。将其代替纯净水，用于制备化验标准品菌种→菌种分离→筛选→活化或强化菌种（含生产用试管斜面菌种）→一级液体试管→转二级三角瓶杜仲叶提取液益生菌发酵种子液。
2、杜仲叶乳酸菌发酵种子液的制备：称取乳酸菌基本培养基配方用料和用量：蛋白胨1.5-2.0kg、牛肉膏0.75kg、氯化钠0.75kg，葡萄糖1.5-2.0kg，依次加入100l左右的杜仲叶提取液中，加热溶解后补充杜仲叶提取液至150l。
3、杜仲叶提取液乳酸菌种子发酵液的制备程序：按无菌操作要求进行，取标准乳酸菌种1支→转一级液体试管（37℃-39℃培养22h-24h）→测试活化后的活菌平皿菌落（37℃-39℃培养48h）→筛选优良菌落至一级试管（37℃-39℃培养22h-24h）→转生产用试管斜面（37℃-39℃培养22h-24h）→置冰箱冷藏备用→取冰箱冷藏斜面菌种转一级液体试管（37℃-39℃培养22h-24h）→转二级三角瓶（37℃-39℃培养22h-24h）→最后转接枸杞子提取液空白培养基发酵。
二、枸杞子提取液的制备
1、称取符合中国药典规格的宁夏产的枸杞子150kg，加入纯净水150l浸润2小时，再加入纯净水900l至不锈钢提取罐，设定加热提取温度95℃-98℃加热提取1.5小时；第二次加入纯净水600l，设定加热温度95℃-98℃加热提取40分钟，分离提取液；合并两次提取液约等于1500l，最后用少量纯净水冲洗枸杞子药渣，准确补足1500l即为1500l。
2、以上述枸杞子提取液代替纯净水空白培养液的制备：称取蛋白胨1500l*1%=15kg、牛肉膏1500l*0.5%=7.5kg、氯化钠1500l*0.3%=4.5kg、葡萄糖1500l*1%=1.5kg、碳酸钙食品级1500l*1%=15kg，加热溶解于约1000l的枸杞中提取液中，以2mol/l盐酸溶液和20%氢氧化钠溶液调制ph值6.5-6.8，最后补充枸杞中提取液至1500l。搅拌均匀后分装于3只1000l的不锈钢发酵罐电热蒸汽灭菌，设定灭菌温度118℃-121℃灭菌时间25-30分钟，夹套通冷却水降温至37℃-39℃，按照无菌操作要求，接入预先制备好的杜仲叶乳酸菌发酵种子液，按接种量8%计算，每罐接种40l，加塞密封启动搅拌，设定培养发酵温度37℃-39℃培养发酵时间18-22小时。通过观察发酵液颜色由深变浅，碳酸钙几乎消失，测试发酵液ph值3.8-4.2即可停止发酵。
3、将上述发酵好的枸杞子提取液，置洁净区内转入不锈钢配料容器内，进行口感和稳定性调配，抽样送检合格后定量灌装，包装入库即为活性乳酸菌素保健饮料。
4、将上述发酵好的枸杞子提取液，置洁净区内倒入不锈钢配料容器内，进行口感和稳定性调配，定量灌装后再经加热100℃-105℃灭菌时间10-15分钟，抽样送检合格后定量灌装，包装入库，即为产品乳酸菌素口服液。
技术特征：
1.一种乳酸菌发酵杜仲叶和枸杞子提取液的乳酸菌营养保健饮料，其特征在于乳酸菌的选择分别为：嗜酸乳杆菌、保加利亚乳酸杆菌和肠链球菌；主成分为杜仲叶提取液、枸杞子提取液及其培养的发酵产物混合；杜仲叶提取液的制备，定量称取符合中国药典规格的杜仲叶（揉碎）按1:1加入纯净水浸润2小时，再按1:6加入纯净水，第一次提取加热95-98提取1.5小时；第二次按1：4加入纯净水，加热95℃-98℃提取40分钟，合并两次提取液代替纯净水，用于乳酸菌发酵种子液的制备。
2.根据权利要求1所述的一种乳酸菌发酵杜仲叶和枸杞子提取液的乳酸菌营养保健饮料，其特征在于：所购乳酸菌标准原始菌种和配方利用杜仲提取液代替纯净水制备成乳酸菌发酵种子液，用于发酵枸杞子提取液，其制备流程为：化验标准菌种→从化验平皿中挑选菌落小而清晰、透明圈大的菌落→进行活化、筛选和强化后→制备成杜仲叶乳酸菌发酵种子液。
3.根据权利要求1所述的一种乳酸菌发酵杜仲叶和枸杞子提取液的乳酸菌营养保健饮料，其特征在于：所述的枸杞子提取液的制备：定量称取符合中国药典的枸杞子，按1:1加入纯净水浸润2小时，再按1:6加入纯净水，加热95℃-98℃提取1小时；第二次按1:4加入纯净水，加热95℃-98℃加热提取40分钟，合并两次提取液代替纯净水，用于制备没有接种乳酸菌之前的枸杞子提取液空白培养基。
4.根据权利要求1所述的一种乳酸菌发酵杜仲叶和枸杞子提取液的乳酸菌营养保健饮料，其特征在于：所述的枸杞子提取液培养基的制备：定量称取枸杞子提取液，补充蛋白胨1%-2%、牛肉膏0.3%-0.5%、氯化钠0.1%-0.3%，葡萄糖1%-2%，碳酸钙（食品级）0.5-1.0%，加热溶解于枸杞子提取液中，以2mol/l盐酸溶液和20%氢氧化钠溶液调制ph值6.5-6.8，最后补充枸杞中提取液至规定的配制体积。
5.根据权利要求1所述的一种乳酸菌发酵杜仲叶和枸杞子提取液的乳酸菌营养保健饮料，其特征在于：将配制好的枸杞子培养基加塞密封置电热蒸汽灭菌器，设定115℃-121℃灭菌25-30分钟，降温至37℃-39℃，按照无菌操作要求，接入权利要求3预先制备好的杜仲叶乳酸菌发酵种子液，控制接种量5%-8%，置于电热恒温摇床培养，设定培养发酵温度37℃-39℃培养发酵18-22小时；同时结合观察发酵液颜色由深变浅，碳酸钙几乎消失，测试发酵液ph值3.8-4.2即可判定发酵液终点。
6.根据权利要求1所述的一种乳酸菌发酵杜仲叶和枸杞子提取液的乳酸菌营养保健饮料，其特征在于：枸杞子乳酸菌发酵液，再经过口感和稳定性调配，取样检验合格后定量灌装，包装入库，商品名称为活性乳酸菌保健饮料。
7.根据权利要求1所述的一种乳酸菌发酵杜仲叶和枸杞子提取液的乳酸菌营养保健饮料，其特征在于：枸杞子乳酸菌发酵液经过口感和稳定性调配好，取样检验合格后定量灌装，经100℃-105℃加热10分钟灭菌，将活性乳酸菌饮料灭活后冷却包装入库，商品名称为乳酸菌素口服液。
技术总结
一种乳酸菌发酵杜仲叶和枸杞子提取液的乳酸菌营养保健饮料，具有营养和保健功能的纯天然乳酸菌饮料；通过乳酸菌对杜仲叶和枸杞子提取液的生物发酵三者优势互补，杜仲叶和枸杞子的营养和生物活性成分，极大地满足了乳酸菌生长繁殖的需要，活性乳酸菌数量大幅度提升；本饮品不但可以充分体会到乳酸菌能有效抑制人体肠道腐败菌生长及调整肠道菌群平衡的功能，同时也进一步增强了枸杞子和杜仲叶提高人体免疫力及强筋骨补肝肾、双向调节血压和降低血糖的功能。
技术研发人员：乌新平;王秀梅;邹吉祥;李照华;顾宝钦;龚文;南立志
受保护的技术使用者：三门峡金测质量技术检验检测有限责任公司
技术研发日：.08.07
技术公布日：.02.21
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